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人成纤维细胞的分离培养制备方式

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 成纤维细胞属于由中胚层分化而来的间质细胞。细胞来源于人正常的皮肤组织,成纤维细胞是一种贴壁培养方式的细胞,由于这些细胞非常容易培养,它们已经被广泛用于细胞和分子生物学研究中。

       一般而言,成纤维细胞能够分泌I型和III型胶原等细胞外基质,并且研究表明不同器官中的成纤维细胞有显著的不同。伤口修复时,成纤维细胞由可增殖,可迁移的表型变为有收缩性的,可重塑基质的表型,同时,它们会分泌大量的透明质酸来应对修复时的炎症反应。

       以下是赛百慷提供的一种人成纤维细胞的制备方式(仅供参考):
       1.首先在分离成纤维细胞时要做到在无菌条件下进行,打开生物安全柜紫外灯30min作无菌处理。
       2.将手术废弃的皮肤组织浸泡75%酒精,消毒2min,
       3.将皮肤组织置含P/S的PBS中清洗至少3遍,
       4.然后用眼科剪除去脂肪及结缔组织等,
       5.将皮肤剪成0.5*0.5 cm小块,放入dish中,加0.1%的dispase溶液,封口膜封口,4℃冰箱过夜消化,
       6.第二天,用镊子将表皮与分开(薄的那层是表皮,厚的那层是),
       7.将剪碎,移至离心管,用0.1%胶原Ⅰ型酶+0.1%胶原Ⅱ型酶+0.1%胶原Ⅳ型酶+ 37℃水浴锅中消化至少2 h(视消化程度而定),
       8.用100 μm网筛过滤,
       9.取滤液,300 g,离心5 min,
       10.用完全培养基重悬沉淀,
       11.铺瓶,
       12.隔天换液。
       以上是皮肤成纤维细胞分离培养的一种方式,不同的技术人员分离培养的方法也不同,使用的试剂比例也不尽相同,皮肤成纤维细胞特异性纤维连接蛋白或波形蛋白表达检测,采用细胞免疫荧光技术。细胞纯度可高达于90%,所有的细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

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