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你知道人胚肾细胞293T是怎么培育出来的吗?

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  人胚肾细胞293T的培养需要准备DMEM-H培养基,90%;优质胎牛血清,10%。也可根据实验需要选择悬浮培养基,使293T细胞悬浮生长。
  1、培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
  2、冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
  3、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过)。第二天换液并检查细胞密度。
  4、细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
 

人胚肾细胞293T

  如果在人胚肾细胞293T培养过程中出现贴壁细胞,传代可参考以下方法:
  1、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
  2、加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
  3、按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
  4、将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
  5、细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。
  在人胚肾细胞293T培养过程中,需要注意以下两个事项:
  1.收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
  2.所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

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