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你真的了解人脐静脉细胞HUVEC实验步骤吗?

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  人脐静脉细胞HUVEC是一种来源于脐带组织的干细胞。它是脐静脉的重要细胞之一,在理论上可以无限期地通过。因此,人脐静脉内皮细胞(HUVEC)经常用于血管内皮细胞实验,而不是静脉内皮细胞或动脉内皮细胞。脐静脉内皮细胞易于获得且来源充足,因此,脐静脉内皮细胞经常用于血管内皮研究。那么,您真的了解它的培养实验步骤吗?
 

人脐静脉细胞HUVEC

  1、将15-20cm长的新生儿脐带储存在无菌PBS溶液中。(注意:应在4℃下保存24小时,在室温下保存不超过6小时,否则将被丢弃。)
  2、将钝针插入脐静脉管,并用无菌PBS溶液冲洗3-5次,直到将脏血洗净为止。
  3、用手术钳夹住脐带下端,添加15ml胶原酶(1mg/ml)在室温下消化15-20分钟,并不时摇动脐带。
  4、消化后,松开下部的手术钳,将消化液倒入50ml无菌离心管中,并用无菌PBS溶液冲洗脐带2-3次。
  5、离心收集的液体(2000rpm)3分钟。
  6、除去上清液,加入10mlM199培养基(添加10u/mlbFGF),用肘部吹动细胞,将所有液体转移到装有明胶的培养瓶中,并在37℃下培养。(注:在每个培养瓶中加入3-4ml无菌1%明胶溶液,充分摇动以使明胶溶液完全覆盖瓶底,并在37℃下孵育至少2小时。使用前将明胶溶液倒入。明胶涂层有助于细胞粘附。)
  7、将人脐静脉细胞HUVEC培养24小时后,倒出培养基并用无菌PBS溶液洗涤2-3次。洗去红细胞和死细胞,并加入10ml新鲜的M199培养基。
  8、应每2天更换一次介质(每次应更换2/3的介质)。
  9、培养5-7天后,细胞可以生长到80-90%的单层,然后可以传代。
  10、倒出培养基,用无菌PBS溶液洗涤2-3次,添加2-3ml消化液(0.25%胰蛋白酶+0.1%EDTA)消化细胞。在显微镜下观察。一旦细胞变圆,添加2-3次含血清的DMEM培养基以终止反应。
  11、用弯头吹干细胞,然后将消化的细胞以2000rpm的速度转移到50ml无菌离心管中3分钟。
  12、倒出上清液,加入10ml新鲜培养基。通常,可以在一瓶中传代3-4瓶细胞,然后据此传代培养。
  13、人脐静脉细胞HUVEC通常传代2-3代(约20天)用于各种实验。

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