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说说人表皮永生化细胞HACAT的培养步骤

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  说说人表皮永生化细胞HACAT的培养步骤。
  1、复苏细胞:在37℃水浴中快速摇动装有1mL细胞悬液的冷冻管融化,加入5mL培养基并充分混合。在1000RPM下离心5分钟,弃去上清液,加入4-6mL完全培养基并充分吹扫。然后将所有细胞悬浮液添加到培养瓶中,并培养过夜(或将细胞悬浮液添加到6cm皿中)并培养过夜。第二天换培养基,检查细胞密度。
  2、细胞传代:如果细胞密度达到80%-90%,则可以传代培养。
 

人表皮永生化细胞HACAT

  对于贴壁人表皮永生化细胞HACAT ,传代可参考以下方法:
  (1)弃去培养上清液,并用不含钙和镁离子的PBS冲洗细胞1-2次。
  (2)向培养瓶中加入1-2ml消化液(0.25%胰蛋白酶-0.53mMEDTA),将其置于37℃的培养箱中1-2min,然后在显微镜下观察细胞的消化情况,如果大部分细胞旋转并掉落后,迅速将其带回手术台,轻敲培养瓶几次,并加入5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。
  (3)轻轻吹干细胞,然后将其完全吸出。以1000RPM离心8-10分钟,弃去上清液,加入1-2mL培养基并充分吹扫。
  (4)加入5-6ml/瓶培养液,然后将细胞悬液分成新的培养皿或瓶,其中装有5-6ml培养液的比例为1:2至1:5。
  对于悬浮人表皮永生化细胞HACAT,传代可参考以下方法:
  (1)收集细胞,以1000RPM离心8-10分钟,弃去上清液,并加入1-2mL培养基吹净,然后将细胞悬液分成新的培养皿或瓶,其中含有8ml培养基,比例为1:2至1:5。
  (2)可以选择一半的介质更换方法。丢弃一半培养基后,悬浮剩余的细胞,然后将细胞悬浮液分成新的含有8ml培养基的细胞悬浮液,比例为1:2至1:3。在盘子或瓶子里。
  3、细胞冻存:当细胞生长良好时,可以将其冷冻保存。将贴壁细胞冷冻保存后,弃去培养基并加入少量胰蛋白酶。细胞变成圆形并脱落后,通过离心收集它们。

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