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拿到人肝癌细胞HEPG2后要先这么处理

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  拿到人肝癌细胞HEPG2后要先这么处理。
  1、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入250px皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
  2、人肝癌细胞HEPG2细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
  对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
  (1)弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
  (2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
  (3)按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
  (4)收到人肝癌细胞后推荐将细胞悬液按1:2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中,建议冻存一支备用,后续传代根据实际情况按1:2到1:5的比例进行。
  人肝癌细胞HEPG2细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。
  下面T25瓶为例;
  (1)细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入2ml完全培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
  (2)1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮,加DMSO至终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中,注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
  (3)将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
 

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