人乳腺癌细胞MDA-MB-231的传代步骤是怎样的？

　　人乳腺癌细胞MDA-MB-231通常在无菌环境中使用层流罩。培养基的更换与细胞的生长速度密切相关。如果在6-16小时内更换培养基，可以去除残留的亚甲基枫树和死细胞。可用于进一步科学研究，不能用于治疗等方面。

　　血清的类型和质量会对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的生长产生影响。血清是细胞培养非常重要的营养来源。错误使用血清会使细胞无法存活。细胞无法存活的另一个原因是培养基。每个细胞系都有其特定的用途和适应的细胞培养基。如果突然使用不同培养条件的培养基，大多数细胞不能立即适应。

　　1、用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒，将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲，然后置于无菌操作台，打开瓶口，将其中的培养液去掉，再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代，一般2到3天换一次液；

　　2、待细胞长满瓶底面积80%-90%，需要对其进行传代，传代比例为1:3到1:6；

　　3、人乳腺癌细胞MDA-MB-231传代步骤：将0.25%胰酶-0.53mMEDTA消化液置于37°预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入3-5mlPBS，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2ml预热好的胰酶，置于37°孵育消化（第一次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间，记录最佳消化时间，以便于下次消化），消化好后加入3ml*培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之*脱落，然后收集细胞悬液，1200rpm离心3min，弃上清，加入*培养基重悬细胞，进行传代。