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人乳腺癌细胞MDA-MB-231的传代步骤是怎样的?

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  人乳腺癌细胞MDA-MB-231通常在无菌环境中使用层流罩。培养基的更换与细胞的生长速度密切相关。如果在6-16小时内更换培养基,可以去除残留的亚甲基枫树和死细胞。可用于进一步科学研究,不能用于治疗等方面。
  血清的类型和质量会对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的生长产生影响。血清是细胞培养非常重要的营养来源。错误使用血清会使细胞无法存活。细胞无法存活的另一个原因是培养基。每个细胞系都有其特定的用途和适应的细胞培养基。如果突然使用不同培养条件的培养基,大多数细胞不能立即适应。
  1、用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒,将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲,然后置于无菌操作台,打开瓶口,将其中的培养液去掉,再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养,根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代,一般2到3天换一次液;
  2、待细胞长满瓶底面积80%-90%,需要对其进行传代,传代比例为1:3到1:6;
  3、人乳腺癌细胞MDA-MB-231传代步骤:将0.25%胰酶-0.53mMEDTA消化液置于37°预热,倒掉培养瓶中的培养基,往培养瓶中加入3-5mlPBS,轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2ml预热好的胰酶,置于37°孵育消化(第一次消化需时常取出置于显微镜下观察,以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间,记录最佳消化时间,以便于下次消化),消化好后加入3ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞,使之完全脱落,然后收集细胞悬液,1200rpm离心3min,弃上清,加入完全培养基重悬细胞,进行传代。

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