产品分类

您的位置:首页 > 技术文章 > 一分钟带你了解免疫荧光技术步骤及原理

技术文章

一分钟带你了解免疫荧光技术步骤及原理

更新更新时间:2023-06-25 浏览次数:681

  IF实验
  免疫荧光技术
  原理:免疫荧光技术是根据抗原抗体反应的原理,先将已知的抗原或抗体标记上荧光素,制成荧光抗体,再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检测组织或细胞内的相应抗原(或抗体)。在组织或细胞内形成的抗原抗体复合物上含有标记的荧光素,利用荧光显微镜观察标本,荧光素受外来激发光的照射而发生明亮的荧光(黄绿色或橘红色),可以看见荧光所在的组织细胞,从而确定抗原或抗体的性质、定位,以及利用定量技术测定含量。
  步骤:
  细胞准备:对单层生长细胞,在传代培养时,将细胞接种到预先放置有处理过的盖玻片的培养皿中,待细胞接近长成单层后取出盖玻片,PBS洗两次;对悬浮生长细胞,取对数生长细胞,用PBS离心洗涤(1000rpm,5min)2次,用细胞离心甩片机制备细胞片或直接制备细胞涂片。
  固定:根据需要选择适当的固定剂固定细胞。固定完毕后的细胞可置于含叠氮纳的PBS中4℃保存3个月。PBS洗涤3×5 min.
  通透:使用交联剂(如多聚甲醛)固定后的细胞,一般需要在加入抗体孵育前,对细胞进行通透处理,以保证抗体能够到达抗原部位。选择通透剂应充分考虑抗原蛋白的性质。通透的时间一般在5-15min.通透后用PBS洗涤3×5 min.
  封闭:使用封闭液对细胞进行封闭,时间一般为30min.
  一抗结合:室温孵育1h或者4℃过夜。PBST漂洗3次,每次冲洗5min.
  二抗结合:间接免疫荧光需要使用二抗。室温避光孵育1h.PBST漂洗3次,每次冲洗5min后,再用蒸馏水漂洗一次。
  封片及检测:滴加封片剂一滴,封片,荧光显微镜检查。

赛百慷(上海)生物技术股份有限公司地址:上海市奉贤区茂园路260号临港南桥科技城56号楼7层 邮箱:1987295773@qq.com

公司版权所有 © 2024   备案号:沪ICP备15001479号-4  管理登陆  技术支持:化工仪器网  GoogleSitemap

在线客服 联系方式 二维码

服务热线

400-021-2021

扫一扫,关注我们