产品分类

您的位置:首页 > 技术文章 > 293T细胞在培养的过程中的特别注意事项有哪些?

技术文章

293T细胞在培养的过程中的特别注意事项有哪些?

更新更新时间:2024-06-27 浏览次数:144

 HEK-293T细胞是293T(293tsA1609neo)细胞系(ATCC CRL-11268)的衍生物。细胞持续表达SV40抗原,该细胞常用于转染实验,转染效率较高。(转染一般以50%密度铺板,待细胞刚刚贴到皿壁上后(一般8-10小时),即可进行转染操作)

293T细胞的培养条件除了用DMEM(推荐iCell-0001)培养基;胎牛血清,10%;还要添加L-谷氨酰胺(2mM)1%;NEAA  1% ; 双抗 1%等添加物,但是293T细胞在培养的过程中贴壁能力较弱,在培养过程中特别要注意:

先,293T细胞贴壁能力较弱,培养时可酌情使用预铺0.2%明胶的培养瓶/培养皿。wan全培养液中需添加热灭活胎牛血清。细胞生长不能过密,过密细胞容易脱落,脱落下来的细胞可以通过离心收集,使用0.25% Trypsin-0.53 mM EDTA 消化后继续培养。

其次,如果发生293T细胞不贴壁,漂浮在培养基中的现象,请确认所使用的DMEM中碳酸氢钠浓度及培养箱中CO2浓度。并参考以下培养体系:

a) DMEM由1.5 g/L碳酸氢钠配制而成,使用5%CO2培养箱。

b) DMEM由3.7 g/L碳酸氢钠配制而成,使用10%CO2培养箱。

当使用碳酸氢钠含量高的培养基时,必须将这些细胞在10%CO2中孵育,以便正确缓冲培养基。当培养基没有适当缓冲时,239T细胞虽然可以存活,但将无法粘附并保持漂浮在培养基中。

293T细胞为悬浮和轻微的贴壁细胞,传代可以参考以下方法:

1. 收集:将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。由于细胞贴壁不牢PBS润洗后细胞会脱落所以PBS也要回收到离心管中。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL)置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

3. 将收集到的悬浮细胞、pbs清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000rpml离心5min,弃去上清,补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的wan全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

 

3) 细胞冻存: 收到细胞后建议在培养3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

293T细胞参考文献:

【1】Ding L, Zeng Q, Wu J, et al. Caveolin1 regulates oxidative stressinduced senescence in nucleus pulposus cells primarily via the p53/p21 signaling pathway in vitro[J]. Molecular Medicine Reports, 2017, 16(6): 9521-9527.

 

【2】邱进, 刘辉, 袁芳, 等. MEF2C 基因启动子区碱基突变对转录活性的影响[J]. 新疆医科大学学报, 2017, 40(5): 606-611.

【3】Geng F, Lu G F, Ji M H, et al. MicroRNA-26b-3p/ANTXR1 signaling modulates proliferation, migration, and apoptosis of glioma[J]. American journal of translational research, 2019, 11(12): 7568.


镜像绮点(上海)细胞技术有限公司地址:上海市奉贤区茂园路260号临港南桥科技城56号楼7层 邮箱:3607106385@qq.com

公司版权所有 © 2024   备案号:沪ICP备2024064724号-1  管理登陆  技术支持:化工仪器网  GoogleSitemap

在线客服 联系方式 二维码

服务热线

400-021-2021

扫一扫,关注我们