您的位置:首页 > 技术文章 > 如何培养小鼠小胶质BV2细胞?
技术文章
培养小鼠小胶质BV2细胞需要遵循一系列特定的步骤和注意事项,以确保细胞的健康生长和实验的准确性。以下是培养BV2细胞的一般步骤:
一、准备阶段
1、培养基准备:使用DMEM高糖培养基,添加10%胎牛血清(FBS)和1%青霉素-链霉素(P/S)。
2、环境控制:确保培养箱内的空气占95%,二氧化碳浓度为5%,温度保持在37℃。
二、复苏阶段
1、提前将水浴锅预热至37℃,培养基复温至室温或37℃,离心机设置好转速。
2、从液氮罐中取出细胞,迅速摇晃直至融化至米粒大小冰块时终止水浴,整个过程不超过2分钟。
3、直接将冻存管以离心力150g(约900rpm)左右离心2分钟,弃上清,用预热的培养基缓慢加入冻存管,轻柔重悬细胞后接种至培养瓶中。
三、传代阶段
1、轻轻吸走培养上清,留2-3mL培养基轻轻吹打细胞面吹下细胞。
2、将细胞悬液转移至离心管,900rpm离心3-5分钟,弃上清。
3、加新的全培养基轻轻重悬细胞,均匀分到新的培养瓶里,补足全培养基,将培养瓶放回培养箱静置培养。
四、冻存阶段
1、配制程序性冻存液,推荐配方为92%FBS+8%DMSO或92%全培养基+8%DMSO。
2、先将细胞按传代步骤获得细胞沉淀,加入适量程序性冻存液轻轻重悬细胞,并将细胞悬液转移至冻存管中。
3、将冻存管放入程序性冻存盒,放入-80℃冰箱过夜,然后转移至液氮保存并登记细胞保存位置。
总之,培养小鼠小胶质BV2细胞需要严格控制培养条件、及时处理细胞状态变化,并遵循规范的操作流程。通过这些措施,可以确保BV2细胞的健康生长和实验的顺利进行。