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18621133861更新更新时间:2025-02-27 浏览次数:184
小鼠肺微血管内皮细胞构成半选择性屏障,该屏障对于肺气体交换,调节液体和可溶物在血液与肺间质之间的流动具有重要意义。它还具有代谢功能,可以执行一定的非呼吸功能。在肺损伤中,肺微血管内皮细胞是活性氧类的重要靶细胞之一。
在肺炎的发生过程中,神经体液介质和氧化剂作用于内皮细胞,使得细胞间隙渗透性增加,蛋白质由血液进入间质。细胞间隙渗透性的增加导致低氧血症,出现成人呼吸窘迫综合征和非心源性肺水肿。
小鼠肺微血管内皮细胞来源于实验动物的正常肺组织,细胞为上皮样,多角形细胞,贴壁培养,采用CD31免疫荧光染色鉴定为阳性,细胞纯度高于90%,不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
1.试验所需仪器设备及试剂
(1)仪器
仪器名称 | 规格型号 |
生物安全柜 | BSC-1500ⅡA2-X |
CO2细胞培养箱 | BC-J160S |
荧光倒置显微镜 | DS-Ri2 |
高速冷冻离心机 | Multifuge X1R |
电热恒温鼓风干燥箱 | DHG-9123A |
电热恒温震荡水槽 | DK-2B |
(2)试剂耗材
试剂名称 | 规格/货号 |
T25细胞培养瓶 | 430639 |
血球计数板 | Neubauer improved |
24孔板专用细胞爬片 | YA0350 |
细胞培养孔板 | WHB-24 |
胎牛血清 | 1414426 |
内皮细胞培养基 | Primed-icell-002 |
0.25%胰蛋白酶(含0.02%EDTA) | 1734858 |
2、小鼠肺微血管内皮细胞的分离培养
1) 将5-10d的乳鼠浸泡入75%乙醇中,移入生物安全柜,
2) 从胸部解剖乳鼠,取出双肺置于预冷的PBS中,尽可能的除去结缔组织等,
3) 取肺边缘部分,剪碎,将组织块移入T25培养瓶中,倒置于细胞培养箱中,
4) 2h后,培养瓶中注入2 mL内皮培养基,小心将培养瓶正置于培养箱,确保组织块不会飘起来,
5) 每3d换液2mL,待细胞从组织块中爬出来后,隔2d换液,待细胞融合达到60-70%左右时,去除组织块,将肺微血管内皮细胞重新铺瓶。
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