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人胚肾细胞293T细胞培养有哪些优点?

更新时间:2023-06-16 浏览次数:1061

  人胚肾细胞293T是一种广泛应用于分子生物学、基因工程和病毒学等领域的细胞系。它来源于人类胚胎中的肾小管上皮细胞。

人胚肾细胞293T


       人胚肾细胞293T细胞培养的优点如下:
  1、研究对象为活细胞
  在实验中,可以根据需要保持细胞活力,并且可以长期监测、检测甚至定量评估一些活细胞的状况,包括活细胞的形状、结构和生命活动。
  2、研究条件可以人为控制
  pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学条件可根据实际需要人为控制。同时,可以应用化学、物理和生物因素作为实验观察的条件。这些因素也可以受到严格控制。
  3、研究样本能达到比较均一
  经过一定代数的细胞培养,得到的细胞系可以达到均一,属于同一类型的细胞。如有必要,可采用克隆等方法对细胞进行纯化。
  4、研究内容易于观察、检测和记录
  使用了各种研究技术,如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共聚焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等仪器设备。
 
  人胚肾细胞293T培养操作流程:
  1、培养基的制备及培养冻存条件:
  1)准备RPMI-1640培养基(rpmi-1640:gibco,货号21875-091),90%;优质胎牛血清为10%。
  2)培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37℃,培养箱湿度70%~80%。
  3)冷冻保存液:90%血清,10%DMSO,现用现用,液氮保存。
  2、细胞处理:
  1)复苏细胞:将含有1ml细胞悬液的冻存管放入37℃水浴中(水面应低于冻存管盖),摇匀解冻,转移至15ml离心管中,加入4ml培养基提前准备好,搅拌均匀。1000rpm离心4分钟,弃上清,加入1ml培养基并吹匀。然后将所有细胞悬液转移到含有5ml培养基的培养瓶中过夜培养。第二天,更换液体并检查细胞密度。
  2)人胚肾细胞293T细胞培养:细胞密度达到80%-90%即可培养。
 
  具有以下特点:
  1、高转染率:由于其双倍体状态,在转染时比单倍体细胞更容易接受外源DNA并表达。
  2、适合制备重组腺病毒和慢病毒载体:可以高效地产生包含重组基因的腺病毒或慢病毒,使其成为常用的基因传递工具之一。
  3、广泛应用于原代细胞文化:由于其稳定性和不受质粘附影响而被广泛用作原代细胞文化系统的对照,如神经元、心肌等。
  4、容易获取且无法再生:相较其他已知的能够支持多次分裂生长的癌变标准株(如HeLa),293T不能连续无限度地进行传代,所以不存在恶性增殖的风险。
 

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