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人胚肾细胞293T培养步骤主要如下

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  人胚肾细胞293T是293细胞株插入SV40T-抗原的温度敏感基因后产生的高转染效率的衍生细胞株。人胚肾细胞;293,上皮状,早期报道中指出该细胞基因组中含有腺病毒5(Ad5)基因组的左侧端和右侧端的DNA,但是明确了只存在其左侧端的DNA。经过对Ad5的插入点的克隆测序发现,Ad5的1~4344位线性核苷酸整合入细胞染色体19q13.2。该细胞为人类腺病毒载体扩增的宿主。可表达异常的玻连蛋白的细胞表面受体,由整合素β1亚单位和玻连蛋白受体α-v亚单位组成。生物安全级别为2级。
  人胚肾细胞293T培养步骤主要如下:
  1、培养皿/瓶用枪头或移液管吸去原培养液;
  2、无菌PBS或无菌生理盐水洗涤3次(按培养体积加入);
  3、加入适量胰酶消化适当时间(一般胰酶为0.25%;9cm/10cm培养皿和25cm培养瓶,一次加入1mL胰酶。消化时间视细胞类型等多种情况综合考虑,一般如果是细胞株,非原代培养,消化1-2分钟足矣);
  4、用枪头吹打数十次(视细胞类型而定。一般细胞株30-50次吧,耗时一般2分钟左右);
  5、加入适量体积完全培养基终止胰酶消化(如果是9cm/10cm培养皿和25cm培养瓶,可以加入1mL完全培养基;现在培养瓶(皿)里有2mL溶液)。
  6、现在可以将溶液进行分瓶(2mL)。如果是细胞株,直接均分到两个培养瓶(皿)里。如果是原代培养,可以根据消化时间来对细胞进行分离;因此可以将溶液(2mL)都转入新的培养瓶(皿)。
  7、将两个培养瓶(皿)补足完全培养基到正常体积(果是9cm/10cm培养皿和25cm培养瓶,为5mL完全培养液)
  8、镜下观察。刚刚传代细胞还没贴壁,悬浮在溶液中,呈圆形。一般2h之内会贴壁,如果已经贴壁,根据细胞类型有不同的形态,但通常都不是圆形。
  9、镜下观察无误之后,再放入细胞培养箱。培养瓶(皿)放入之前,可以用消毒酒精先擦一下。
  10、人胚肾细胞293T传代之后,第二天细胞换液一次。当然,也可以视情况而定。
 

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