产品分类

您的位置:首页 > 技术文章 > 人表皮永生化细胞HACAT的传代方法都有哪些?

技术文章

人表皮永生化细胞HACAT的传代方法都有哪些?

时间: 浏览次数:75

  人表皮永生化细胞HACAT的培养步骤:
  1)细胞复苏:将含有1ml细胞悬液的冷冻管在37℃水浴中摇晃解冻,加入5ml培养基混匀。1000rpm离心5分钟,弃上清,加入4-6ml完全培养基吹匀。然后,将所有细胞悬液加入培养瓶中过夜培养(或将细胞悬液加入6cm培养皿中)培养过夜。第二天,更换液体并检查细胞密度。
  2)细胞传代:当细胞密度达到80%-90%时,可进行传代。
  一、贴壁细胞可采用以下方法传代:
  1、弃去培养上清液,用不含钙镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
  2、在培养瓶中加入1-2ml消化液,置于37℃培养箱中消化1-2min,然后在显微镜下观察细胞消化情况。如果大部分细胞变圆脱落,迅速将其放回控制台,轻敲培养瓶数次,然后加入5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。
  3、轻轻吹打细胞,待完全脱落后吸出,1000rpm离心8-10分钟,弃上清,加1-2ml培养基吹匀。
  4、按5-6ml/瓶加入培养液,将细胞悬液按1:2~1:5的比例分装到装有5-6ml培养液的新皿或瓶中。

 

人表皮永生化细胞HACAT

 

  二、对于悬浮细胞,可采用以下方法进行传代:
  方法1:收集人表皮永生化细胞HACAT,1000rpm离心8-10分钟,弃上清,加1-2ml培养基吹匀。将细胞悬液按1:2至1:5的比例分入装有8ml培养基的新培养皿或瓶中。
  方法2:换一半介质即可。弃去一半培养基后,将剩余的细胞悬浮,将细胞悬浮液以1:2至1:3的比例分装到装有8ml培养基的新皿或瓶中。
  三、细胞冷冻保存:细胞生长良好时可进行冷冻保存。贴壁细胞冷冻后弃去培养基加入少量胰蛋白酶。细胞变圆脱落后,离心收集。将它们以1000rpm离心8-10分钟以去除上清液。根据冷冻量加入血清和DMSO。冷冻比例为90%FBS+10%DMSO。
  PS:如果客户收到2ml管状细胞人表皮永生化细胞HACAT,收到细胞后,用75%酒精喷洒整管消毒,放入超净台或安全柜,严格无菌操作;将管状细胞转移到T25培养瓶或6cm培养皿中,加入完全培养基约5ml,混匀,放入培养箱过夜培养,然后检查细胞密度:如果密度不超过80%,换溶液以继续培养、继代培养或酌情冷冻。如果密度超过80%,可以直接通过(方法同上)。
 

赛百慷(上海)生物技术股份有限公司地址:上海徐汇区银都路466号 邮箱:1987295773@qq.com

公司版权所有 © 2021   备案号:  管理登陆  技术支持:化工仪器网  GoogleSitemap

在线客服 联系方式 二维码

服务热线

400-021-2021

扫一扫,关注我们