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人宫颈癌癌细胞HELA培养基及培养冻存条件准备

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  人宫颈癌癌细胞HELA培养基及培养冻存条件准备:
  
  1、准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080),90%;北美胎牛血清(UnitedStates,GIBCO,货号16000-044),10%。
  
  2、培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
  
  3、冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
 
  

人宫颈癌癌细胞HELA

 
 

  人宫颈癌癌细胞HELA处理:
  
  1、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
  
  2、细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
  
  对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
  
  (1)弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
  
  (2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。
  
  (3)轻轻吹打后吸出,移入15ml离心管中,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养液后吹匀。
  
  (4)移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。
  
  3、人宫颈癌癌细胞HELA冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,先要消化处理并进行细胞计数。消化方法按照细胞传代方法的1-3步骤进行,最后的重悬液使用血清。悬浮细胞直接计数后离心,用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中。

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