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小鼠结肠癌细胞MC38培养基及培养冻存条件准备

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  小鼠结肠癌细胞MC38培养基及培养冻存条件准备:
 
  1、准备DMEM培养基(DMEM,GIBCO,货号11965-092),90%;胎牛血清,10%。
 
  2、培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
 
  3、冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
 
 

小鼠结肠癌细胞MC38
 

 

  小鼠结肠癌细胞MC38细胞处理:
 
  1、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
 
  2、细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
 
  对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
 
  (1)弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
 
  (2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
 
  (3)按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
 
  (4)将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
 
  3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。
 
  小鼠结肠癌细胞MC38注意事项:
 
  1、收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
 
  2、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

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