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大鼠心肌细胞H9C2该怎么进行细胞处理?

时间:2020-09-21 浏览次数:32

  大鼠心肌细胞H9C2是源自胚胎大鼠心脏的大鼠心肌细胞,具有许多骨骼肌特征。该细胞系中的成肌细胞可以融合形成多核肌管,并对乙酰胆碱刺激作出反应。如果培养基中的血清浓度降低到1%,融合会很快发生。那么细胞该怎么处理呢?
 

大鼠心肌细胞H9C2

  1、复苏细胞:将装有1ml细胞悬液的冷冻保存管放入37℃水浴中(水面应低于冷冻保存管的盖部分)并摇匀并融化,然后将其转移到装有4ml培养基的15ml离心管中。并混合均匀。以1000rpm离心4分钟,弃去上清液,加入1ml培养基并充分吹扫。然后将所有细胞悬浮液转移至含有5ml培养基的培养瓶中过夜培养。第二天,更换液体并检查细胞密度。
  2、细胞传代:如果大鼠心肌细胞H9C2的密度达到80%-90%,则可以进行传代培养。
  (1)丢弃培养上清液,并用不含钙或镁离子的PBS润湿细胞1-2次。
  (2)在培养瓶中加入2ml消化液(0.25%胰蛋白酶-0.53m培养基),在37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞的消化情况。如果大多数细胞变圆形并脱落,请迅速将其带回手术台,轻按培养瓶几次,然后加入3ml培养基终止消化。
  (3)轻轻吹动后,将其吸出,移入15ml离心管中,以1000rpm离心4分钟,弃去上清液,加入1ml培养基,并均匀吹扫。
  (4)转移到制备的含有5ml培养基的t-25烧瓶或含有14ml培养基的t-75烧瓶中。
  3、细胞冻存:大鼠心肌细胞H9C2生长良好时可以冷冻保存。冻结贴壁细胞后,应将其消化并计数。根据细胞传代方法的1-3步进行消化,并使用血清进行悬浮。直接计数悬浮细胞,离心,重悬血清,并加入DMSO至终浓度10%。加入DMSO后,应迅速混合,并按照每1毫升的量将其分配到冷冻储存管中。

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