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人宫颈癌癌细胞HELA培养步骤是怎样的?

时间:2022-12-20 浏览次数:68

  人宫颈癌癌细胞HELA培养步骤是怎样的?
  
  1、培养基及培养冻存条件准备:
  
  (1)准备RPMI-1640培养基;优质胎牛血清,10%;谷氨酰胺,2mM;双抗,1%。
  
  (2)培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
  
  (3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
  
  2、细胞处理:
  
  (1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入250px皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
  
  (2)HeLa人子宫颈癌细胞/STR鉴定/赛百慷(iCell)传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
  
 

人宫颈癌癌细胞HELA

 
 

  对于人宫颈癌癌细胞HELA贴壁细胞,传代可参考以下方法:
  
  1、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
  
  2、加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
  
  3、按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
  
  4、收到细胞后传代推荐将细胞悬液按1:2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中,建议冻存一支备用,后续传代根据实际情况按1:2到1:5的比例进行。
  
  人宫颈癌癌细胞HELA细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。

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