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小鼠小胶质BV2“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段期间,与细胞世代或倍增不同。在一代中,细胞培增3~6次。细胞传代后,一般经过三个阶段:游离期、指数增生期和停止期。常用细胞分裂指数表示细胞增殖的旺盛程度,即细胞群的分裂相数/100个细胞。一般细胞分裂指数介于0.2%~0.5%,肿瘤细胞可达3~5%。接种2~3天分裂增殖旺盛,是活力好时期,称指数增生期(对数生长期),适宜进行各种试验。
收到小鼠小胶质BV2后要如何处理?
1、首先,观察细胞培养瓶是否完好。培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有,请拍照,并及时与致备技术支持联系。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面,显微镜下观察纽胞状态。因运输问题,部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落;先不要打开培养盖,将细胞置于细胞培养箱静置培2-4小时,以便稳定细胞状态。
3、仔细读细胞说明书,了解细胞相关信息,如贴壁特性(贴壁/悬浮)、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、換液频率等。
4、如收到的细胞没有相关培养经验,建议消化时在显微镜下实时观察消化情况,掌握细胞的最佳消化时间,若3分钟内无法脱落的细胞,可以在37℃条件下提高胰酶活性,适当延长时间,从加入胰酶到终止消化的过程,所有操作都要迅速。
5、建议收到细胞后的一次传代比例为1/2最多不要超过1/3。
6、若小鼠小胶质BV2拉丝、黏连则说明消化过度,建议适当缩短消化时间,若发现仅有一半细胞先脱落,则可以优先终止,剩下的继续消化。