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小鼠的海马神经元细胞HT22培养操作规程

更新时间:2023-06-16 浏览次数:1019

  小鼠的海马神经元细胞HT22培养操作规程,供参考:
 
  一、小鼠海马神经元细胞(HT22)培养基及培养冻存条件准备:
  1、准备DMEM培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。
  2、培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
  3、冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
 
  二、细胞处理:
  1、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
  2、细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

  三、对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
  (1)弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
  (2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入2ml此细胞的全培养基终止消化。
  (3)轻轻吹打后吸出,移入15ml离心管中,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养液后吹匀。
  (4)移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。
  3、小鼠的海马神经元细胞HT22细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。
 
小鼠的海马神经元细胞HT22

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