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THP-1人单核细胞白血病细胞/STR鉴定

产品型号: THP-1细胞
产品时间: 2024-07-11
描述:THP-1人单核细胞白血病细胞/STR鉴定
细胞介绍
该细胞对乳汁珠和激活的红细胞有吞噬作用,无表面和胞质免疫球蛋白。可以用佛波醇 TPA诱导单核细胞分化。
细胞特性
1) 来源:急性单核细胞白血病,单核细胞

产品介绍

THP-1人单核细胞白血病细胞/STR鉴定

细胞介绍

该细胞对乳汁珠和激活的红细胞有吞噬作用,无表面和胞质免疫球蛋白。可以用佛波醇 TPA诱导单核细胞分化。

细胞特性

1) 来源:急性单核细胞白血病,单核细胞

2) 形态:单核细胞,悬浮

3) 含量:>1x106 细胞数

4) 规格:T25瓶(15ml离心管)或者1mL冻存管包装

5)  用途:仅供科研使用。

运输和保存

干冰运输及复苏好存活细胞

(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。

(2)复苏的存活细胞15mL离心管常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

细胞接收后的处理

1) 收到细胞后请勿拆除封口膜,75%酒精消毒擦拭瓶壁将15mL离心管置于37℃培养箱放置约1-2h,若发现离心管破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。

2)请在细胞移入2个新的T25培养瓶后,在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚移入培养瓶的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。

THP-1人单核细胞白血病细胞/STR鉴定

一.培养基及培养冻存条件准备

1) 准备RPMI-1640(推荐iCell-0002)培养基;优质胎牛血清,10%;0.05 mM β-巯基乙醇(细胞培养级 推荐:iCell-8211);双抗,1%。

2) 参考传代比例:传代时控制细胞密度在2-4 ×105cell / mL,并在细胞生长至8-10 ×105cell / mL时进行传代。

3) 参考换液频率:传代时换液

4) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。

5) 冻存液:完quan培养液95%,DMSO 5%(使用该冻存液后,按照我库的经验复苏存活率约50%,复苏后需要额外培养7-10天才能恢复生长)

6) 【注意事项】:

该细胞为悬浮细胞,根据培养经验以及客户的反馈,传代时使用【半换液法】对细胞状态较为有利,因此我库建议您使用【半换液法】进行传代。

1. 您在收到我们提供的用15mL离心管(充液为完quan培养基)发货的细胞后,请不要通过离心的方式收集细胞,可以先准备两个新的T25培养瓶,然后将细胞混合均匀后移入两个新的T25培养瓶中,补加培养基到10ml。放入到37℃培养箱中。

2. thp-1悬浮细胞。该细胞在培养时更喜欢温和处理,培养时尽量少对细胞进行离心处理以此造成对细胞的伤害。换液时不要全培养基更换,建议您使用【半换液法】进行传代,添加细胞培养基以稀释细胞至维持密度即可。

3.  细胞对血清质量较为敏感,我库建议您使用进口大品pai优质血清进行培养。FBS不要灭活,如果细胞生长缓慢请尝试使用其他FBS或暂时将FBS浓度增加到20%

4.  该细胞的培养液中需添加β-巯基乙醇(细胞培养级别),若不添加,可能会对细胞状态造成影响。

β-巯基乙醇的稳定性有限,不可将β-巯基乙醇添加到完quan培养基中长期储存,在每次传代或液体添加时再添加β-巯基乙醇。

β-巯基乙醇(2-qiu基乙醇)被添加到淋巴细胞或其他细胞培养物中,因为在培养基中使用的FBS中氨基酸半胱an酸供不应求,而胱an酸则很多。有些细胞(例如T细胞)无法将半胱an酸转运到细胞质中,必须将其转化为半胱an酸。β-巯基乙醇将胱an酸还原为可被细胞转运的形式,然后转化为细胞生长所需的半胱an酸。  β-巯基乙醇还是一种还原剂,可以分解培养中细胞产生的许多有毒代谢产物,从而改善细胞周围的环境。

5.  该细胞对细胞密度较为敏感,培养、传代时请注意保持细胞密度在合适的范围(具体请参考细胞说明书)。

6 . 该细胞冻存后复苏率较低,冻存时请酌情提高细胞量。

7 .通常情况下可以通过向正在生长的细胞中添加完quan培养基来维持细胞的生长,每7天可以将细胞离心并重悬于新配的培养基中,来完成细胞的全换液。

ATCC有关thp-1细胞保持细胞活力的说明

(频繁的细胞计数是监测thp-1的最佳方法。这些细胞应该每2至3天通过向烧瓶中简单加入少量新鲜培养基(使它们具有条件培养基)来培养。您不需要每次都离心细胞并重新传代。当在我们的实验室中培养时,到第2天,细胞通常可以扩增到具有更多培养基的更大的烧瓶中。当细胞密度达到8×10 5个活细胞/ ml时需要进行传代。不允许细胞密度超过1×10(6)活细胞/ ml。)

二. 细胞处理:

1) 冻存细胞的复苏

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完quan培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完quan培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完quan培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2) 细胞换液: 通常情况下可以通过向正在生长的细胞中添加完quan培养基来维持细胞的生长,每7天可以将细胞离心并重悬于新配的培养基中,来完成细胞的全换液。

3) 细胞传代:传代时控制细胞密度在2-4 ×105cell / mL,并在细胞生长至8-10 ×105cell / mL时进行传代。

4) 细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。    

1,细胞冻存时,取上清,可使用血球计数板计数。

2,4min ,1000rpm 离心去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞,根据细胞数量加入冻存液,轻轻混匀,DMSO终浓度为5%,细胞密度2x106/支,每支冻存管冻存1ml细胞悬液,注意冻存管做好标识。


 

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