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人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y/STR鉴定介绍
SH-SY5Y是1970年建自骨瘤转移灶的神经母细胞瘤SK-N-SH细胞系经三次克隆后的亚系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)。该细胞显示中等水平的多巴胺-β-羟基酶活性。SH-SY5Y细胞的饱和密度大于1X106细胞/cm2。
人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y/STR鉴定特性
(1)来源:脑神经母细胞瘤,转移部位骨髓
(2)形态:上皮细胞样,半贴壁生长
(3)含量:>1x106个/mL
(4)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
(5)规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
运输和保存
可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式:
(1)干冰运输,收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏;
(2)存活细胞,收到后应继续生长,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
(3)收到细胞后请拍照,3天内如果发现污染,请及时拍照与我们联系。
SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞/STR鉴定/镜像绮点(iCell)用途:仅供科研使用。
细胞接收后的处理:
(1)收到细胞后,请检查是否漏液,如果漏液,请拍照片发给我们。
(2)请先在显微镜下确认细胞生长状态,酒精消毒瓶壁并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
(3)T25瓶中的培养基取出离心后,去上清,添加6ml新的*培养基,重新加入原T25培养瓶。
(4)如果细胞长满90%请及时进行细胞传代,传代培养用本公司附带的*培养基。
(5)接到细胞次日,请检查细胞是否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。
细胞培养步骤
一.培养基及培养冻存条件准备:
(1)准备MEM/F-12(1:1)培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。
(2)培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
(3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二.细胞处理:
(1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,离心管加入4mL培养基混合均匀。在800-1000RPM条件下离心4-5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入T25培养瓶中培养,补加培养基至6ml。
(2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
1、将上清取出,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2、加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量*培养基终止消化。
3、轻轻打匀后吸出,和上清一起在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,加1-2mL培养液后吹匀。
4、将细胞悬液按1:2到1:5比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中。
注:次传代推荐传代比例为1:2,以后传代比例可根据客户需要自己决定。
(3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。
下面T25瓶为类;
1、细胞冻存时,取出上清,PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入1ml*培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2、4min1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞,根据细胞数量加入血清和DMSO,轻轻混匀,DMSO终浓度为10%,细胞密度1-2xE6/ml,每支冻存管冻存1ml细胞悬液,注意冻存管做好标识。
3、将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
镜像绮点(上海)细胞技术有限公司主要产品和服务介绍:
一、原代细胞服务:
各类模式哺乳动物的多种原代细胞资源
多种人源性正常及肿瘤原代细胞资源
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二、细胞系服务:
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iPS细胞增殖及冷冻保存
iPS基础培养技术实习
新药及实验仪器上市前评估
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