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18621133861产品介绍
HCMEC/D3永生化人脑微血管内皮细胞/STR鉴定
细胞介绍
人脑微血管内皮细胞是人微血管内皮细胞通过含端粒酶逆转录SV40T慢病毒转染得到。
细胞特性
1) 来源:人脑微血管
2) 形态:细胞呈梭状,细长型
3) 含量:>1x106 个/mL
4) 污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
运输和保存
可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式
(1)干冰运输,收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏;
(2)存活细胞,收到后应继续生长,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
(3)收到细胞后请拍照,3天内如果发现污染,请及时拍照与我们联系。
细胞用途:仅供科研使用。
HCMEC/D3永生化人脑微血管内皮细胞/STR鉴定
接收后的处理:
1) 收到细胞后,请检查发货培养瓶的状况,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2) 在显微镜下确认细胞生长状态时,在低倍镜(4或5X物镜)下进行,能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下,同时给刚收到的细胞拍照,(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。
3) 观察好细胞状态后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。
4) 贴壁细胞:在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象,如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长,可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟,弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基的原培养瓶中(或新的培养瓶中)。
5) 悬浮细胞:T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟,弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中(加入按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基)。
6)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。 收到细胞后di一次传代建议1:2传代 。
细胞培养步骤
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备内皮细胞*培养体系(简称:ECM,推荐iCell-0016) 规格:500ml
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
1) 冻存细胞:冻存细胞时,用FBS重悬细胞,然后加入一定量的DMSO,轻轻混合均匀后移入到冻存管中,DMSO终浓度为10%。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,离心管加入4mL培养基混合均匀。在800-1000RPM条件下离心4-5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入T25培养瓶中培养,补加培养基至6ml。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml此细胞的培养基终止消化。
3. 轻轻吹打后吸出,移入15ml离心管中,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养液后吹匀。
4 . 收到细胞后*传代推荐将细胞悬液按1:2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中,建议冻存一支备用,后续传代根据实际情况按1:2到1:4的比例进行。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。
下面T25瓶为类;
1,细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗一遍后加入1-2mlyi酶(含EDTA),细胞变圆脱落后,加入2-3ml含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2,4min 1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞,根据细胞数量加入血清和等体积的冻存液,轻轻混匀,DMSO终浓度为10%,细胞密度不低于1x10E6/ml,每支冻存管冻存1ml细胞悬液,注意冻存管做好标识。
3,将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
镜像绮点(上海)细胞技术有限公司主要产品和技术服务:
一、原代细胞服务
各类模式哺乳动物的多种原代细胞资源;
多种人源性正常及肿瘤原代细胞资源;
原代细胞分离和培养相关试剂、kit、培养基添加剂等;
原代细胞相关技术服务和整体实验外包服务;
二、细胞株/系服务
细胞株/系培养、增殖、冻存和相关说明书;
细胞系培养过程的技术指导;
细胞系培养基、添加剂、血清及相关生长因子、试剂等;
三、iPS细胞
iPS细胞基础培养(有滋养层or无滋养层在);
iPS细胞增殖及冷冻保存;
iPS基础培养技术实习;
新药及实验仪器上市前评估;
四、技术外包服务:各类细胞生物学实验、分子生物学实验、显微镜拍照服务等
五、其他:根据客户需要定制服务等
序号 | 产品名称 | 货号 | 规格 | 售价 | 备注 |
1 | 培养基1640 | icell-0002 | 500ml | 140 |
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2 | 培养基DMEM | icell-0001 | 500ml | 140 |
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3 | 培养基DMEM/F12 | icell-0005 | 500ml | 140 |
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4 | 内皮细胞培养基ECMsciencel | icell-0016 | 500ml | 2280 |
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5 | 动物上皮细胞培养基Epicm-a | icell-0015 | 500ml | 1980 |
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6 | 上皮细胞培养基Epicm | icell-0017 | 500ml | 1980 |
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7 | Mccoy’s 5A 培养基 | icell-0011 | 500ml | 160 |
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8 | MEM培养基 | icell-0012 | 500ml | 140 |
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9 | FBS北美胎牛血清 | GIBCO 16000-044 | 500ml | 6800 |
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10 | FBS墨西哥胎牛血清 | 10437-028 | 500ml | 5616 |
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11 | 马血清 | gibco.16050122 | 500ml | 1489 |
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12 | DMSO | sigma-D2650 | 100ml | 1520 |
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13 | PBS片剂(1000ml) | 09-9400-100 | 100片 | 4170 |
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14 | PS双抗(进口) | 15140-122 | 100ml | 452 |
|
15 | yi蛋白酶 | 25200-072 | 500ml | 665 |
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