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RAW264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞
细胞描述
此细胞株源自Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤。sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原阴性。此细胞株不分泌可检测到的病毒颗粒,XC斑点形成试验阴性。可以胞饮中性红并吞噬乳胶颗粒与酵母聚糖。可以抗体依赖性地分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞。LPS或PPD处理2天可诱导分解红血球但对肿瘤靶细胞无作用。
细胞特性
1) 来源:鼠科白血病病毒诱导的肿瘤;单核细胞;巨噬细胞
2) 形态:不规则圆形,纺锤状,贴壁细胞,少量悬浮。
3) 含量:>1x10^6 细胞数
4) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
5) 用途:仅供科研使用。
运输和保存
干冰运输及复苏好存活细胞
(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
细胞接收后的处理
1)收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3)半贴细胞或贴壁不牢(悬浮)细胞:T25瓶置于37℃培养箱中约2-3h,显微镜下观察细胞的情况,若细胞密度在60%以下,客户需收集T25瓶中的悬浮细胞离心后用完quan培养基重悬后打回到原培养瓶中继续培养,若细胞生长70%-90%对细胞进行传代,传代时需要收集培养基中悬浮的细胞离心后回收。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完quan培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代 。
RAW264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备DMEM(包含2mM L-谷an酰胺,0.11g / L丙tong酸钠) (推荐iCell-0001)培养基;优质胎牛血清10 %;P/S青mei素-链mei素 1%。
2) 注意事项:
(a)在细胞生长的初始阶段,细胞以贴壁的形式生长并呈现出长方体的形态和有“伪足"延伸。随着培养时间的增加,细胞呈现圆形并以叠加的形式生长。细胞密度达到一定的程度,会有细胞以悬浮的方式散落到到培养基中,镜下观察会发现悬浮和贴壁的细胞会同时出现。
(b)该细胞传代时不需要用yi酶消化。传代时,用无菌细胞刮刮拭培养表面将细胞刮落,收集离心后重悬接种到新的培养瓶中。
(c)该细胞形态上包含松散贴壁的纺锤形和圆形或者立方形。当细胞密度较大时,细胞会轻微脱落变圆或者许多细胞堆积在一起,有些细胞甚至脱落漂浮。这些漂浮的细胞是存活的,在传代时应收集起来,离心后细胞沉淀可以继续培养。(d)血清质量差异可能引起细胞贴壁能力变化,应选用高质量的胎牛血清。
3) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
4) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二. 细胞处理:
1)冻存细胞的复苏:
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完quan培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完quan培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完quan培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达70%-90%,即可进行传代培养。
该细胞为悬浮和轻微的贴壁细胞,传代可以参考以下方法:
该细胞用细胞刮铲替代yi酶来对细胞进行处理。用无菌细胞刮铲刮拭细胞附着培养表面将细胞刮落,收集细胞后离心去上清,重悬后接种到新的装有新鲜培养液的培养瓶内。收货后第一次传代1:2进行,后续可以根据实际的情况以1:2~1:4的比例进行传代。
3) 细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
下面T25瓶为例;
1. 1,细胞用细胞刮铲替代yi酶来对细胞进行处理。用无菌细胞刮铲刮拭细胞附着培养表面将细胞刮落,收集细胞。
2. 1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×10^6~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。
将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
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