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HepG2人肝癌细胞/STR鉴定

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产品时间: 2024-06-20
描述:HepG2人肝癌细胞/STR鉴定
人肝癌细胞Hep G2来自15岁男性白人的组织。形态为上皮形,模式染色体数为55,在免疫抑制小鼠中不致瘤。

产品介绍

   HepG2人肝癌细胞/STR鉴定细胞介绍
  该细胞系来自15岁男性白人的组织。形态为上皮形,模式染色体数为55,在免疫抑制小鼠中不致瘤。

人肝癌细胞HEPG2

 

  一、人肝癌细胞HEPG2特性
  1、来源:肝细胞癌
  2、形态:上皮细胞样,贴壁生长
  3、含量:>1x10^6  细胞数
  4、规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
  5、用途:仅供科研使用。

  二、运输和保存
  1、干冰运输及复苏好存活细胞
  (1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
  (2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
  2、细胞接收后的处理
  (1)收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
  (2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
  (3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完quan培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
  (4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完quan培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代 。

  三、培养基及培养冻存条件准备:
  1、准备MEM(推荐iCell-0012)培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。
  2、培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。

  四、人肝癌细胞HEPG2培养注意事项:
  1、hepg2细胞复苏或传代后会有少部分的细胞贴壁和部分悬浮的细胞,复苏两天后细胞会从贴壁细胞向外开始生长,有时细胞再生长过程中,细胞会再贴壁细胞的上方生长,形成不同的细胞层,这种情况会有发生。 在细胞复苏的一周内,培养瓶中 通常会有悬浮的活的细胞团,在换液过程中不要丢弃在这些活的悬浮细胞,可以通过离心(125×g)回收细胞,重新打回到培养瓶中,分离或者丢弃漂浮的活细胞会使细胞数量变少,引起细胞的停滞生长或细胞死亡。
  2、培养条件的细微变化,尤其是pH和培养基中血清的质量,可能会影响细胞的生长状况,在细胞的生长过程中会有细胞内的液泡出现,特别在细胞快要融合是会出现这种情况。培养细胞时使用未被灭活的高质量、低内毒素的胎牛血清,可以使细胞更好的贴壁和形成单层细胞。
  3、细胞在生长过程中可以通过将血清浓度提到到20%来改善细胞生长缓慢的情况。(参考atcc 有关该细胞的描述)
  3、冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。

  五、细胞处理:
  1、冻存细胞的复苏:
  将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完quan培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完quan培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完quan培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
  2、细胞传代:如果细胞密度达70%-90%,即可进行传代培养。

  六、该细胞为轻微贴壁和少量悬浮培养细胞,传代可以参考以下方法:
  1、收集:将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。由于细胞贴壁不牢PBS润洗后细胞会脱落所以PBS也要回收到离心管中。
  2、加入0.25%(w / v)yi蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL)置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10�S的培养基来终止消化。
  3、将收集到的悬浮细胞、pbs清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000rpml离心5min,弃去上清,补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完quan培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
  3、细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
 

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