服务热线
400-021-2021
欢迎访问镜像绮点(上海)细胞技术有限公司网站
16674676768产品介绍
HUH-7 人肝癌细胞/STR鉴定
细胞介绍
人肝癌细胞HuH-7是一种高分化的肝癌细胞。最初是由Nakabayshi H和Sato J于1982年建系,取自一名57岁的日本男性的肝脏肿瘤组织,目前是用于体外研究丙型肝炎病毒(HCV)和登革热病毒的细胞模型。据报道,该细胞表达甲胎蛋白,yi酶α抗体,血浆铜蓝蛋白,纤维蛋白原,纤维粘连蛋白等,也可以用无血清培养,会在培养基内分泌许多血清蛋白和alpha phyto蛋白。
细胞特性
1) 来源:肝
2) 形态:上皮细胞样,贴璧生长
3) 含量:>1x106 细胞数
4) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
5) 用途:仅供科研使用。
运输和保存
干冰运输及复苏好存活细胞
(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
细胞接收后的处理
1)收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的wan全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的wan全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代 。
一.培养基及培养冻存条件准备
1) 准备DMEM(推荐iCell-0001)培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。
2) 注意事项:
HuH-7细胞低密度状态时细胞有触角,细胞呈块状生长。细胞胞体上有黑色颗粒是正常现象。
3) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
4) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
HUH-7 人肝癌细胞/STR鉴定
二.细胞处理
1) 冻存细胞的复苏
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mLwan全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,wan全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8mlwan全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)yi蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3.轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的wan全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3)细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
下面T25瓶为例;
1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.
2. 1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。
3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
注意事项
1.收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
2.收到细胞先不开瓶盖,瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时(视细胞密度而定)稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收细胞时就整体外观拍一张照片,观察培养基的颜色和是否有漏液情况,随后在显微镜下拍下细胞状态,100*,200*各一张),观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。
3.由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响,故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态,故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明,期间间隔时间不能大于7天。
4.所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
镜像绮点(上海)细胞技术有限公司主要产品和技术服务:
1、原代细胞服务
(1)各类模式哺乳动物的多种原代细胞资源;
(2)多种人源性正常及肿瘤原代细胞资源;
(3)原代细胞分离和培养相关试剂、kit、培养基添加剂等;
(4)原代细胞相关技术服务和整体实验外包服务;
1、细胞株/系服务
(1)细胞株/系培养、增殖、冻存和相关说明书;
(2)细胞系培养过程的技术指导;
(3)细胞系培养基、添加剂、血清及相关生长因子、试剂等;
3、iPS细胞
(1)iPS细胞基础培养(有滋养层or无滋养层在);
(2)iPS细胞增殖及冷冻保存;
(3)iPS基础培养技术实习;
(4)新药及实验仪器上市前评估;
4、技术外包服务:各类细胞生物学实验、分子生物学实验、显微镜拍照服务等
5、其他:根据客户需要定制服务等
相关产品
镜像绮点(上海)细胞技术有限公司地址:上海市奉贤区茂园路260号临港南桥科技城56号楼7层 邮箱:3352341519@qq.com
公司版权所有 © 2024 备案号:沪ICP备2024064724号-1 管理登陆 技术支持:化工仪器网 GoogleSitemap